The 2007 Nobel Prize in Physiology or Medicine
2007 Nobel Prize in Physiology or Medicine goes to Mario R. Capecchi, Martin J. Evans and Oliver Smithies "for their discoveries of principles for introduci
ng specific gene modifications in mice by use of embryonic stem cells"
去年是Knock down，今年是knock out。 最后一句是什么意思？ 原帖由 orionsnow 于 2007-10-8 17:03 发表 http://www.dolc.de/forum/images/common/back.gif
最后一句是什么意思？
同问同问，感觉差不多嘛！$考虑$ 呵呵，敢情楼上二位不是做生物的吧？
去年得生理学和医学奖的是RNA interference. 是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。但是RNA interference只能降低基因的表达水平，并不能完全的关掉这个基因。
今年得奖的是基因剔除小鼠。基因剔除小鼠模型的制作采用基因打靶技术，就是用一段坏了的基因序列去替代生物体基因组上原来的那个好基因序列，使生物体的每个细胞里面的那个基因不表达或失去活性，从而研究此基因功能，阐述相应疾病发病机理，并为治疗此疾病提供有力的模型工具。
所以说去年knock down，今年knock out 原帖由 matthew 于 2007-10-8 20:40 发表 http://www.dolc.de/forum/images/common/back.gif
呵呵，敢情楼上二位不是做生物的吧？
去年得生理学和医学奖的是RNA interference. 是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基 ...
这样啊!长见识了!谢谢楼上的解释呵! 不知道今年的化学奖会使谁$考虑$
反正德国人是很久都没德国化学诺贝尔奖了。 原帖由 matthew 于 2007-10-8 20:40 发表 http://www.dolc.de/forum/images/common/back.gif
呵呵，敢情楼上二位不是做生物的吧？
去年得生理学和医学奖的是RNA interference. 是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基 ...
补冲一下，
这次奖的突破点如下：
1. 在哺乳动物系统内采取同源重组（homologous recombination）的技术。 同源重组（homologous recombination）技术本身已经在50年前有人在细菌中用到了， Joshua Lederberg 因此在 1958 获得 Nobel Prize.
2. 运用 Embryonic stem cells 作为载体来做 Germ Line gene modification 老鼠系， 获得稳定的遗传，并尊循孟德尔的遗传法则（Martin Evans 的贡献）。
3. 同源重组 和 胚胎干细胞载体 技术的结合产生了 哺乳动物 Gene Modification 的伟大发明。 下面就是这个发现中非常重要的一篇论文：
Mansour, S. L., K. R. Thomas and M. R. Capecchi (1988). Disruption of the proto-oncogene int-2 in mouse embryo-derived stem cells:A general strategy for targeting mutations to nonselectable genes. Nature336:348-352. 原帖由 matthew 于 2007-10-8 20:40 发表 http://www.dolc.de/forum/images/common/back.gif
呵呵，敢情楼上二位不是做生物的吧？
去年得生理学和医学奖的是RNA interference. 是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时，该mRNA发生降解而导致基 ...
另外 Gene Modification 不只有KO (Knock－Out) 技术， 还有 KI (Knock—In), 还有近年来用的很多的conditional KO 技术，可以选择性的在生物体特定的组织敲除特定的gene， 比如 Cre-Lox 等。 $支持$ $支持$
多谢楼上的补充！不过说一句，我是在做科普，大可不必讲的那么细，嘿嘿。 还没看那篇nature的文章。不知道HR在mammals上的效率高不高。
用cre/loxp，如果是定点的话，第一步还是得靠HR。
感觉这个技术不算太高深啊，居然得了nobel prize。先汗一个。估计这话要挨拍了。
ls的几位翻译的真地道。表扬一个。
顺便说下，偶做FLP/FRT系统的。invirtrogen很早就有一个flp-in system了。不知道跟这个得奖的有什么区别没。 原帖由 junhuaq 于 2007-10-8 23:44 发表 http://www.dolc.de/forum/images/common/back.gif
还没看那篇nature的文章。不知道HR在mammals上的效率高不高。
用cre/loxp，如果是定点的话，第一步还是得靠HR。
感觉这个技术不算太高深啊，居然得了nobel prize。先汗一个。估计这话要挨拍了。
ls的几位翻译 ...
同源重组效率在哺乳动物里面效率不高。。。毕竟不是低等的酵母。。。
所以要有markers 来帮助大规模的筛选
利用胚胎干细胞也是一个重大的发现哦
毕竟现在只有小鼠的胚胎干细胞系，所以只有小鼠的knock out 这贴我喜欢。长知识的。大家继续。$支持$ 今天跟实验室的印度小m聊了聊,她做的跟这个得奖的基本就是一样的.问了下那篇文章，人家说是80年代末的， 刚看下，果然。
HR总得用marker筛选的.用marker也有很多trap的.用的好，效率高很多.
要定位KO或者KI, 不知道除了HR还有什么方法没?偶做的虽然也说是定位，但第一步还是随机的. 原帖由 junhuaq 于 2007-10-9 12:46 发表 http://www.dolc.de/forum/images/common/back.gif
今天跟实验室的印度小m聊了聊,她做的跟这个得奖的基本就是一样的.问了下那篇文章，人家说是80年代末的， 刚看下，果然。
HR总得用marker筛选的.用marker也有很多trap的.用的好，效率高很多.
要定位KO或者KI,...
knockout是有很多tricks
cell type-specific gene ablation...conditioned knockout
我了解的同源重组markers,一般用个一个neo加一个tk
不明白为什么你说同源重组是随机的
哺乳动物同源重组效率不高
但是没有同源序列,也没办法同源重组啊 ls的，偶说的做定位不是用HR，但是也叫site-specific integration,但是第一步是随即的。不是象HR那样第一步就定位了的。
KO和KI都是需要有selection的trick的。neo和tk，一个positive selection,一个是negative selection，其实negective的选择效果并不好，但是没有后续蛋白处理的麻烦。一半hygromycin也用来做positive selection。还有ATG trap等方法。还可以用荧光蛋白，FACS sorting。
mammals也要看什么细胞，不同的细胞系，估计对于HR的效率差别不小。
KO也可以用tet-on tet-off代替吧。干妈非要把他给KO呢。;) 原帖由 junhuaq 于 2007-10-9 21:28 发表 http://www.dolc.de/forum/images/common/back.gif
ls的，偶说的做定位不是用HR，但是也叫site-specific integration,但是第一步是随即的。不是象HR那样第一步就定位了的。
KO和KI都是需要有selection的trick的。neo和tk，一个positive selection,一个是negativ ...
要用tet的系统得在细胞里面另外表达Tet
细胞系里面这个好办到,整个动物水平的....我不知道....
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